Nous utilisons des cookies pour personnaliser le contenu, fournir des fonctionnalités de médias sociaux et analyser le trafic sur notre site. Vous consentez à l'utilisation de cookies si vous continuez à utiliser nos sites Web. Pour plus d'informations, lisez la page sur notre politique de confidentialité.
Affichage de contenus web
                 
Affichage de contenus web

High-performance vloeistofchromatografie (HPLC)

Wat is HPLC?

High-performance vloeistofchromatografie of hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) is een chromatografische methode die wordt gebruikt om een mengsel van verbindingen in de analytische en biochemische chemie te scheiden om de afzonderlijke componenten van het mengsel te identificeren, te kwantificeren of te zuiveren.

Omgekeerde-fase-HPLC of Ultra-High Performance Liquid Chromatography (UHPLC) is een veelgebruikte scheidingswijze. Het zorgt voor de dynamische retentie van verbindingen met hydrofobe en organische functionaliteit. Een combinatie van hydrofobe en van der Waals-interacties tussen alle doelverbindingen en zowel de stationaire als de mobiele fase maakt de retentie van deze verbindingen mogelijk door de omgekeerde fase.

 

Hoe werkt HPLC?

 

In zeer kleine hoeveelheden wordt het te scheiden en te testen monstermengsel via een kolom in een stroom van mobiele fase gestuurd, die via een kolom in een stromende mobiele fase sijpelt. Er zijn verschillende soorten kolommen beschikbaar met sorbens van verschillende korrelgroottes en oppervlakken.

Het mengsel beweegt zich met verschillende snelheden door de kolom en heeft een wisselwerking met het sorptiemiddel, ook wel de stationaire fase genoemd. De snelheid van elke component in het mengsel hangt af van 1) de chemische aard ervan, 2) de aard van de kolom en 3) de samenstelling van de mobiele fase. Het tijdstip waarop een specifieke analyt uit de kolom komt, wordt de retentietijd genoemd. De retentietijd wordt onder specifieke omstandigheden gemeten en beschouwd als het identificatiekenmerk van een bepaalde analyt.

 

Sorberende deeltjes kunnen hydrofoob of polair van aard zijn. De meest gebruikte mobiele fasen zijn elke mengbare combinatie van water en organische oplosmiddelen zoals acetonitril en methanol. Ook watervrije mobiele fasen kunnen worden gebruikt.

De waterige component van de mobiele fase kan zuren bevatten zoals mierenzuur, fosforzuur of trifluorazijnzuur of zouten om de monstercomponenten te kunnen scheiden. De samenstelling van de mobiele fase wordt tijdens de chromatografische analyse constant of gevarieerd gehouden. De constante aanpak is effectief voor de scheiding van de monsterbestanddelen die niet erg verschillend zijn in hun affiniteit voor de stationaire fase. In de gevarieerde aanpak evolueert de samenstelling van de mobiele fase van een lage tot een hoge elutiesterkte. De elutiesterkte van de mobiele fase wordt gereflecteerd door de retentietijden van de analyten, waarbij een hoge elutiesterkte een snelle elutie oplevert.

De samenstelling van de mobiele fase wordt gekozen op basis van de intensiteit van de interacties tussen verschillende monstercomponenten en de stationaire fase.

Het HPLC-partitioneringsproces lijkt sterk op het vloeistof-vloeistofextractieproces, behalve dat het eerste een continu proces is, in tegenstelling tot het laatste, dat een stapsgewijs proces is. Het is aangeraden te experimenteren met partitioneringsprocessen om de exacte HPLC-methode te bepalen die een adequate scheiding mogelijk maakt.

Toepassingen van HPLC

 

 

Het hoofddoel van de HPLC-techniek is het identificeren, kwantificeren en zuiveren van een bepaalde analyt of verbinding. Zowel kwantitatieve als kwalitatieve analyses kunne worden uitgevoerd. HPLC's kunnen in de volgende toepassingen worden gebruikt:

 

 

Waterzuivering

 

Detectie van onzuiverheden in de farmaceutische industrie

 

Voorconcentratie van sporencomponenten

 

Chromatografie van ligand-uitwisselingschromatografie

 

Ionenuitwisselingschromatografie van eiwitten

 

High-pH anionen-uitwisselingschromatografie van koolhydraten en oligosacchariden met hoge pH-waarde

 

Messer, uw partner voor HPLC

Nadat het stoffenmengsel is gescheiden, kunnen de stoffen in hun zuivere vorm worden teruggewonnen door eenvoudigweg het oplosmiddel CO2 op te vangen en af te geven. Voor de extractie en analyse van zeer zuivere stoffen moet het kooldioxide ook zeer zuiver zijn. Gewoonlijk bevat kooldioxide verschillende hoeveelheden koolwaterstoffen als onzuiverheid, afhankelijk van het productieproces. Daarom wordt het gebruik van kooldioxide met een zuiverheidsgraad van 5,5 SFC / SFE-kwaliteit aanbevolen voor een zeer zuivere extractie en in het bijzonder voor chromatografie.

 

 

HPLC kopen

 

U kunt als bedrijf of als particulier HPLC kopen bij één van onze verdeelpunten in België. De meeste klanten bestellen onze flessen online of telefonisch. Naargelang het verdeelpunt kunt u de flessen afhalen of bij u thuis laten leveren. Bel ons voor meer informatie over de leveringsmogelijkheden.

 

Bestel uw waterstofgas online